摘要：99.7％的宫颈癌有HPV的感染。这提供了调节性DC免疫治疗的靶点。用HPV抗原预处理DC刺激产生的CTL可以消除表达有HPV16抗原的小鼠的肿瘤。在动物模型和临床实验种肿瘤融解物可以有效的冲击DC，使其表达肿瘤相关抗原，产生有意义的抗肿瘤反应。声处理HPV产生的融解物冲击同源DC能够产生HPV特异性MHC-I、MHC-IIT细胞。合成的双链DNA在体外可以介导DC
的成熟并产生高水平的IL-12。然而，原型聚合物I:G有临床毒性。初步临床实验非毒性原型聚合物类似物polyI:polyG可以有效介导人单核源性DC的成熟，稳定表达IL-12。因此用肿瘤融解物冲击人单核源性DC及双链dsRNA促进DC成熟可以提供有效的Th1特异性抗肿瘤T细胞反应。这一办法最近被用于子宫颈癌的临床试验。
宫颈癌免疫治疗的原理：全世界470000妇女患有宫颈癌，传统的治疗有40%s死亡率，因此需要新的辅助治疗，包括肿瘤疫苗。99.7％宫颈癌有HPV
DNA的发现。HPV的E6E7早期基因可以和宿主基因融合，表达的HPV特异性蛋白与MHC连接表达于细胞表面，提供了免疫治疗靶点。
在CIN（宫颈上皮癌）及宫颈癌的病人外周血及肿瘤浸润物的T细胞中发现了HPV特异性CTL
反应。病灶中的CTL大于外周血提示了肿瘤局部特异性效应细胞的聚集。
在恢复中的局部损伤部位检测到CD4+T细胞及DTH提示辅助性T细胞在抗HPV肿瘤免疫中的作用。HPV
16特异性T细胞反应在持久的HPV感染和肿瘤病人中被检测。但HPV特异性T细胞在已经接种和为接种疫苗的病人中低。
临床上一T细胞为基础的疫苗对HPV相关恶性肿瘤的疗效的检测需要用ELISPOT及四聚体分析等一些敏感的方法，以检测HPV特异性CTL和T辅助细胞的免疫反应。而且需要证明抗肿瘤效应，这在恶性进行性肿瘤和近期进行抗肿瘤治疗的病人中很难证明，因为他们表现了免疫抑制。恶性进行性肿瘤糟糕的状况使他们很难成为免疫治疗的候选者。但是，Borysiewiczet
al.等认为在免疫接种TA-HPV后的恶性进行性肿瘤的病人可以产生HPV特异性CTL反应。由于实验没有设置对照因此需要进一步的实验证实。Small
et al.发现之前的骨盆放疗化疗不会影响HPV肽疫苗免疫反应的有效性。
DC细胞是体内强大的抗原呈递细胞，启动CTL和Th1反应。他们能够捕获呈递抗原到局部淋巴结介导T细胞反应。这些特征是用HPV冲击DC治疗宫颈癌的基础。用HPV16
E7 class I peptide冲击的DC免疫接种消除了80％鼠的HPV16
E7负荷瘤。在人体，不同来源的合成肿瘤抗原肽或肿瘤融解物冲击的DC显示了重要的抗肿瘤作用。但最近在一些关键问题上出现了不一致的意见：如如何激发合适的免疫发应和激活DC的合理的方法，还有就是DC疫苗的接种途径，剂量及剂量日程表。
2.1抗原负载
来自于自体或同种异体的肿瘤融解物可以使DC同时表达MHC-IMHC-2肿瘤抗原从而产生特异的免疫反应。为成熟的DC可以有效的吞噬细胞片断，呈递抗原。肿瘤融解物可以提供各种肿瘤抗原，从而避免了抗原变异而引起
的免疫逃避。肿瘤融解物冲击的鼠DC介导T细胞免疫效应，消除了鼠肺部肿瘤转移灶。在临床中此方法依然有效。
从健康人及宫颈癌受试者获得的DC，在体外接受声处理过肿瘤融解物的冲击后，可以使MHC-1
HPV限制的CTL介导的表达有HPV16E7的经EBV转化的B细胞的融解。这提示我们开始研究九名复发的宫颈癌病人。在体外用自体或异体的肿瘤融解刺激108个DC后，输入病人体内，产生了CTL和Th－1反应。其中一个病人的HPV16
E711–20特异性的CTL从接种前的0到接种后的2.2％。因此诱发恶性宫颈癌病人体内的Th反应是可行的。但用未成熟DC进行肿瘤治疗是不合适的。
2.2DC细胞的成熟和激活
DC 的成熟在诱发CTL中起关键作用。在体外，成熟的DC可以有效的呈递抗原，诱发CTL反应，刺激Th。临床上免疫接种未成熟DC，为了产生免疫反应，这些DC必须在体内经刺激成熟，而这些刺激物是不明确的（可能是表达于坏死肿瘤细胞表面的炎症因子或热休克蛋白）。DC的成熟使起捕获能力下降，表面MHC及共刺激物表达增加，IL－12增加，细胞因子受体发生改变。成熟的DC可以迁移至淋巴结，刺激T细胞产生Th－1淋巴素和IL-10（可以使机体对肿瘤相关耐受原不敏感）。
在动物模型中，DC抗肿瘤免疫的好坏取决于CD4 CD8T细胞反应，Th－1
细胞及IL-12的产生。DC产生的IL-12有利于抗肿瘤免疫反应。
然而，是激活DC还是危险信号尚未确定。合成的病毒多核苷酸类似物如多聚I：多聚C在体外是促DC激活成熟的
因子，能够介导DC产生稳定的表型，分泌IL-12。这种双链可以模仿病毒的危险信号并被DC细胞Toll3受体识别.体外，此多聚RNA的作用优于TNF-a。
多聚I：多聚C是原型病毒双链RNA类似物，但在体内有毒性，会引起肾衰竭，过敏反应，凝血障碍。GMP没有此问题。聚肌胞<免疫调节药在临床研究中毒性极小。
DC的培养方法：1000 IU/ml GM-CSF1000
IU/ml IL4无血清培养6天。未成熟DC分别用多聚I：多聚C，Ampligen和对照，37度，4－72h检测IL-12的量，CD83，表面共刺激分子等一些DC激活成熟的标志的产生Ampligen，多聚I：多聚C都可以是DC成熟，另外，CCR-7，一种重要
的与促迁移有关的分子表达也有上调。有生物活性的IL12p70在20h达到最大，一直持续到72h。我们的实验表面，用GM-CSF和TNF－a不能刺激表达IL-12P70。初步实验的结果支持
Ampligen作为DC成熟及稳定表达IL-12的因子的作用。
我们的结论是，恶性宫颈肿瘤病人，在体外经过肿瘤融解物冲击的DC，用新的合成的双链DNA类似物促进其成熟提供了更有效的Th－1抗肿瘤免疫。这种组合治疗最近在进行临床试验。
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