目的:为了获得能高效表达同种肿瘤的刺激分子的同种肿瘤细胞与鼠的DC融合细胞株,并分析融合细胞的生物学特性和H(22)-DC融合细胞诱导CTL活化的能力。
方法:应用密度梯度离心法从鼠的脾脏分离DC,并根据对培养板的半粘附特性和FcR进行纯化,然后应用GM-CSF
and IL-4进行培养。获得大量的DC。然后应用PEG聚已二醇将DC与H(22)进行融合,融合细胞具有CD11c表面分子标记。H(22)-DC细胞MACS分选器进行分选。细胞培养技术,免疫化学枝术,光学显微镜等用来检测体外细胞增殖和形态特征等。作为免疫原,H(22)-DC接种于BALB/C鼠右腋皮下,观察体内肿瘤基因的表达情况,MTT法体内脾脏的CTL的活性。
结果: DC分离后,形成表达CD11c+分子和具有不规则的形态特征,离表达CD80,CD86和CDE54分子。H22细胞是CD11c-的球形且体积较大,不表达CD80,CD86和CD54。H(22)-DC是CD11c+细胞,且具有较大体积,球形,或不规则形态特征,同时也高表达CD80,
CD86和 CD54。H(22)-DC是能在体外分裂和增殖的,但相对于H(22)来说,它的增殖活性是明显减弱的,它的增殖曲线比H(22)要平的得多。皮下接种60天后,H(22)-DC在鼠体内未能表现出肿瘤生长,与对照组相比具有差异性(P<0.01)。在输入新的H(22)-DC的小鼠的脾脏内的抗H(22)的CTL是明显高于对照组。
结论: H(22)-DC能够显著刺激特异的小鼠的脾脏内的抗H(22)的CTL的活性,这提
示融合细胞已经获得了抗原递呈功能和表达H(22)特异抗原的功能,而目前尚不能鉴定这些特异的抗原位点。H(22)-DC
能能够诱导抗肿瘤免疫反应,虽然简单的H(22)和DC混合能在一定程度上刺激被肿瘤抑制的CTL的生长与活性,但却不能阻抑肿瘤
的生长。这表明DC疫苗很有可能成为一种有效的肝癌免疫治疗的有效方法。
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